خدمات سنتز رپرایمر

سنتز پرایمر

پرایمرها می توانند با ارائه ‘3-انتهای گروه هیدروکسیل در هنگام هیبریداسیون مکمل با DNA هدف، سنتز DNA با واسطه DNA پلیمراز را تحریک کنند. برای تکثیر موفقیت آمیز PCR، سنتز پرایمرها نیز یکی از عوامل کلیدی است زیرا آنها در درجه اول مسئول تعیین ویژگی PCR هستند. بر اساس طراحی منطقی اولیه، کار سنتز نیاز به بررسی بیشتر دارد. در حال حاضر، سنتز پرایمر عمدتاً با استفاده از ماشین‌های سنتز اسید نوکلئیک ویژه انجام می‌شود که می‌توانند پرایمرهایی با طول حداکثر حدود 70 نوکلئوتید را سنتز کنند. مکانیسم شیمیایی متکی بر یک سری واکنش های شیمی آلی غیر آنزیمی است. متداول ترین روش ها بر اساس β- سیانواتیل فسفوآمیدیت (β-cyanoethyl phosphoamidite) و چرخه H-phosphonate هستند.

 مراحل سنتز پرایمر

قبل از واکنش، همه معرف ها به طور جداگانه در بخش های مختلف سنتز کننده DNA ذخیره می شوند. قابل توجه است که مکان‌های واکنش‌پذیر این معرف‌ها مسدود شده‌اند، بنابراین واکنش‌های شیمیایی تنها زمانی رخ می‌دهد که از اسید یا قلیایی برای حذف این گروه‌های مسدودکننده استفاده شود.

دتریتیلاسیون (Detritylation): اولین مرحله حذف گروه مسدودکننده انتهای ‘5 دی متوکسی تریتیل (DMT) با تیمار دی کلرو استیک اسید است که منجر به در معرض قرار گیری یک گروه هیدروکسیل یک نوکلئوتید می شود.

فعال سازی: تترازول برای فعال کردن انتهای ‘3 نوکلئوتید دیگر استفاده می شود.

جفت شدن: این نوکلئوتید فعال شده از طریق واکنش condensation به انتهای  ‘5 نوکلئوتید به دست آمده در مرحله اول کوپل می شود.

اکسیداسیون: از یدید می توان برای اکسید کردن phosphite ester به یک phosphate esterاستفاده کرد.

پوشاندن (Capping): به منظور جلوگیری از تولید الیگونوکلئوتیدهای ناخواسته، تمام گروه های هیدروکسیل انتهایی ‘5 باید به عنوان یک مرحله پیشگیرانه درپوش گذاشته شوند.

iCellGene می­تواند خدمات طراحی و سنتز پرایمر PCR سفارشی یک مرحله ای را با کیفیت بالا و راندمان بالا ارائه دهد.